重组dna的基本步骤
一、重组dna技术包括哪些主要步骤
重组DNA技术主要包括四个步骤：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达。
1、提取目的基因
获取目的基因主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。
2、目的基因与运载体结合
目的基因与运载体结合的过程实际上是不同来源的DNA重新组合的过程，是基因工程的核心。
3、将目的基因导入受体细胞
用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
4、目的基因的检测和表达
目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。
扩展资料
重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
重组DNA技术使用的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶。常用的载体有质粒载体、噬菌体载体、Ti质粒、人工染色体。
参考资料来源：百度百科-重组DNA技术
二、DNA重组技术是怎样的原理
原理是将两种DNA分子通过限制性内切酶和连接酶拼接到一起发挥作用。
重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如，如果运载体是质粒，受体细胞是细菌。
一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
扩展资料：
基因工程利用重组技术，在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对各种生物的核酸（基因）进行改造和重新组合，然后导入微生物或真核细胞内，使重组基因在细胞内表达，产生出人类需要的基因产物，或者改造、创造新特性的生物类型。
从实质上讲，基因工程的定义强调了外源DNA分子的新组合被引入到一种新的寄主生物中进行繁殖。这种DNA分子的新组合是按工程学的方法进行设计和操作的，这就赋予基因工程跨越天然物种屏障的能力，克服了固有的生物种间限制，扩大和带来了定向改造生物的可能性，这是基因工程的最大特点。
三、DNA的重组方式有哪些
DNA重组（DNA recombination）实质上指的是遗传重组（genetic recombination），也称为遗传改组（genetic reshuffling），是指两个不同姐妹染色体间遗传物质的交换。DNA重组导致后代产生不同于任一亲本的新性状。真核生物减数分裂期间的DNA重组产生新的遗传信息，并可以从父母传给后代。大多数DNA重组是天然存在的。
DNA重组（DNA recombination）实质上指的是遗传重组（genetic recombination），也称为遗传改组（genetic reshuffling），是指两个不同姐妹染色体间遗传物质的交换。DNA重组导致后代产生不同于任一亲本的新性状。真核生物减数分裂期间的DNA重组产生新的遗传信息，并可以从父母传给后代。大多数DNA重组是天然存在的。
真核生物减数分裂过程中的DNA重组涉及同源染色体的配对和随后的染色体之间的信息交换。信息交换可以通过复制完成，也可以通过DNA链的断裂和修复完成。在减数分裂和有丝分裂中，重组发生在相似的DNA分子（同源序列）之间。在减数分裂中，非姐妹同源染色体彼此配对，造成非姐妹同源物之间的DNA重组。在减数分裂细胞和有丝分裂细胞中，同源染色体之间的重组是DNA修复常用的机制。
基因转换-同源序列的复制过程，也属于DNA重组。
DNA重组和重组DNA的修复也发生在无性繁殖的细菌和古细菌中。
可以在实验室（体外）环境中人工诱导DNA重组，产生用于疫苗开发的重组DNA。
染色体交换
真核生物中染色体交换促进了减数分裂过程中的DNA重组。交换过程导致后代具有与其亲本不同的基因组合，并且偶尔可以产生新的嵌合等位基因。由DNA重组引起的基因改组增加了遗传变异。
染色体交叉涉及从父母遗传的配对染色体之间的重组，通常在减数分裂过程中发生。在前期I（粗线期）期间，四种染色单体彼此紧密聚集，两个配对染色单体上的同源位点可以彼此紧密配对，并可以交换遗传信息 。因为重组可以在染色体的任何位置以小概率发生，所以两个位点之间的重组频率取决于它们之间的距离。因此，对于在同一染色体上足够远的基因，交换量足以破坏等位基因之间的相关性。
基因转换
在基因转换中，一条染色体上部分遗传物质被复制到另一条染色体，而提供这部分遗传物质的染色体序列并没有被改变。在减数分裂DNA重组发生位点，基因转换高频率发生。通常在真菌杂交中研究基因转化 ，其中可以方便地观察到单个减数分裂的4种产物。
非同源重组
在基因转换中，一条染色体上部分遗传物质被复制到另一条染色体，而提供这部分遗传物质的染色体序列并没有被改变。在减数分裂DNA重组发生位点，基因转换高频率发生。通常在真菌杂交中研究基因转化 ，其中可以方便地观察到单个减数分裂的4种产物。
减数分裂重组
在减数分裂早期出现的四种染色单体中的两种（前期I）彼此配对并且能够相互作用。重组由双链断裂引发。其它类型的DNA损伤也可能引发重组。例如，交联剂如丝裂霉素C引起链间交联可以通过HRR修复，引发重组。
重组产物有两种：染色体侧翼区域被交换的“交叉”（CO）型和染色体侧翼区域未被交换的“非交叉”（NCO）产物。CO型重组通过DHJ途径形成两个“Holliday junctions”，每个junction中两个参与的染色单体之间都存在单链交换。NCO重组体通过称为“合成依赖性链退火”（SDSA）的方法产生。 NCO/ SDSA类型的重组事件似乎比CO/ DHJ类型更常见
四、DNA分子杂交与重组有何不同
DNA分子杂交
：DNA分子杂交的基础是，具有互补碱基序列的DNA分子，可以通过碱基对之间形成氢键等，形成稳定的双链区。在进行DNA分子杂交前，先要将两种生物的DNA分子从细胞中提取出来，再通过加热或提高pH的方法，将双链DNA分子分离成为单链，这个过程称为变性。然后，将两种生物的DNA单链放在一起杂交，其中一种生物的DNA单链事先用同位素进行标记。如果两种生物DNA分子之间存在互补的部分，旧能形成双链区。由于同位素被检出的灵敏度高，即使两种生物DNA分子之间形成百万分之一的双链区，也能够被检出
重组DNA技术（recombinant
DNA
technique）又称遗传工程，在体外重新组合脱氧核糖核酸（DNA）分子，并使它们在适当的细胞中增殖的遗传操作。这种操作可把特定的基因组合到载体上，并使之在受体细胞中增殖和表达
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