端粒检测方法(端粒酶活性检测)

一、端粒和端粒酶是如何保护染色体的

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端粒使DNA末端处于高度凝集状态，避免了DNA酶的降解，避免了染色体融合，从而维持了遗传信息的稳定性。随着DNA复制的进行，端粒会变短，端粒酶就会发挥作用，募集相关的蛋白或酶，延长端粒到合适长度。

端粒DNA是由简单的DNA高度重复序列组成的，染色体末端沿着5'到3'方向的链富含 GT。在酵母和人中，端粒序列分别为C1－3A/TG1－3和TTAGGG/CCCTAA，并有许多蛋白与端粒DNA结合。端粒DNA主要功能有：第一，保护染色体不被核酸酶降解；第二，防止染色体相互融合；第三，为端粒酶提供底物，解决DNA复制的末端隐缩，保证染色体的完全复制。端粒、着丝粒和复制原点是染色体保持完整和稳定的三大要素。同时，端粒又是基因调控的特殊位点,常可抑制位于端粒附近基因的转录活性（称为端粒的位置效应，TPE）。在大多真核生物中，端粒的延长是由端粒酶催化的，另外，重组机制也介导端粒的延长。

端粒与人体衰老挂上了钩：第一、细胞愈老，其端粒长度愈短；细胞愈年轻，端粒愈长，端粒与细胞老化有关系。衰老细胞中的一些端粒丢失了大部分端粒重复序列。当细胞端粒的功能受损时，就出现衰老，而当端粒缩短至关键长度后，衰老加速，临近死亡。第二、正常细胞端粒较短。细胞分裂会使端粒变短，分裂一次，缩短一点，就像磨损铁杆一样，如果磨损得只剩下一个残根时，细胞就接近衰老。细胞分裂一次其端粒的DNA丢失约30～200bp(碱基对)。第三、研究发现，细胞中存在一种酶，它合成端粒。端粒的复制不能由经典的DNA聚合酶催化进行，而是由一种特殊的逆转录酶——端粒酶完成。正常人体细胞中检测不到端粒酶。一些良性病变细胞，体外培养的成纤维细胞中也测不到端粒酶活性。但在生殖细胞、睾丸、卵巢、胎盘及胎儿细胞中此酶为阳性。令人注目的发现是，恶性肿瘤细胞具有高活性的端粒酶，端粒酶阳性的肿瘤有卯艇癌、淋巴瘤、急性白血病、乳腺癌、结肠癌、肺癌等等。人类肿瘤中广泛地存在着较高的端粒酶耥端挝酶作为肿瘤治疗的靶点，是当前较受关注的热点之一。

二、什么是端粒酶

端粒酶，一种负责细胞端粒延伸的酶是基本的核蛋白逆转录酶，它能将端粒DNA加到真核染色体末端，填补DNA复制过程中丢失的端粒，延长端粒修复时间，防止端粒因细胞分裂而丢失，增加细胞分裂次数。端粒在维持不同种类细胞的染色体稳定性和细胞活性方面起着重要作用。端粒酶能延长和缩短端粒，从而促进细胞体外增殖。

端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，在肿瘤中被重新激活，从而可能参与恶性转化。端粒酶在保持端粒稳定、基因组完整、细胞长期的活性和潜在的继续增殖能力等方面有重要作用。

扩展资料：

在正常人细胞中，端粒酶的活性受到密切的调控。只有造血细胞、干细胞和生殖细胞不断分裂，才能检测到端粒酶活性。当细胞分化成熟时，它必须负责体内不同组织的需要并履行自己的职责，因此端粒酶的活性将逐渐消失。对细胞来说，能否继续分裂并不重要，但分化后的细胞将承担更重要的使命，即让组织和器官运转，使生命得以延续。

参考资料来源：百度百科-端粒酶

参考资料来源：百度百科-逆转录酶

三、美国进口的端粒酶是什么有什么功效

端粒酶是在细胞中负责端粒的延长的一种酶，是基本的核蛋白逆转录酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端，把DNA复制损失的端粒填补起来，使端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂的次数增加。

端粒酶的活性在真核细胞中可检测到，其功能是合成染色体末端的端粒，使因每次细胞分裂而逐渐缩短的端粒长度得以补偿，进而稳定端粒长度。主要特征是用它自身携带的RNA作模板，以dNTP为原料，通过逆转录催化合成后延长链5‘端DNA片段或外加重复单位。端粒酶在细胞中的主要生物学功能，是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度。

扩展资料

近年有关端粒酶与肿瘤关系的研究进展表明，在肿瘤细胞中端粒酶还参与了对肿瘤细胞的凋亡和基因组稳定的调控过程。与端粒酶的多重生物学活性相对应，肿瘤细胞中也存在复杂的端粒酶调控网络。通过蛋白质-蛋白质相互作用在翻译后水平对端粒酶活性及功能进行调控，则是目前研究端粒酶调控机制的热点之一。

端粒酶的特性让人们看到了长生不老的曙光。根据端区学说的原理，可否将人类体细胞引入端粒酶使细胞不断生长，从而达到青春常驻，这是人类未来研究的方向。

参考资料来源：百度百科-端粒酶

四、端粒酶活性简介

目录 1拼音 2英文参考 3概述 4端粒酶活性的医学检查 4.1检查名称 4.2分类 4.3端粒酶活性的测定原理 4.4试剂 4.5操作方法 4.6正常值 4.7化验结果临床意义 4.8附注 4.9相关疾病 1拼音

duān lì méi huó xìng

Telomerase activity

端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构，由一富含鸟嘌呤的重复DNA序列及其相关蛋白组成。端粒是保护染色体末端稳定必不可少的结构。端粒长度的维持需要端粒酶活性的存在。永生细胞和肿瘤细胞能够长期生存，端粒酶起到了重要的作用。端粒酶是由RNA和蛋白体组成的复合体，属一种专一的依赖RNA的逆转录酶，能以自身的RNA为模板，从头合成染色体末端的端粒DNA，弥补细胞分裂时端粒DNA的丢失，维持端粒的长度，保持染色体的动态平衡，使细胞获得永生化。自1994年Kim建立了高敏感度的、以PCR为基础的检测端粒酶的方法以来，端粒酶引起了人们的广泛关注。人们发现，端粒酶与细胞的增生、分化和不死性有着极为密切的关系，已成为目前肿瘤和衰老基础研究的热点之一。

端粒酶活性

血清学检查>肿瘤免疫检测

聚合酶链反应技术：聚合酶链反应是在体外进行的由3个基本步骤组成的循环反应。第一步变性：将所有扩增的基因片段加热，使双链之间的氢键断裂，分解成两条单核苷酸链；第二步退火：当温度下降时，化学合成的寡聚核苷酸引物即与所要扩增基因两侧的DNA相合；第三步延伸：在合适缓冲液，即镁离子和4种脱氧核苷酸存在的条件下，DNA聚合酶能忠实地根据模板堿基序列合成互补链，从引物的3＇端进行延伸，合成的方向为5＇→3＇，从而合成与原来结构相同的基因片段2分子。3个步骤组成1个循环，每循环1次DNA分子数按指数倍增。

聚合酶链反应的基本条件包括纯化的DNA或RNA基因组，用于合成DNA的单核苷酸，寡聚核苷酸引物DNA聚合酶，各种缓冲液，快速改变温度的能力及专用检测系统。

（2）DNA/RNA的抽提与纯化：同本节核酸探针技术中的DNA/RNA的抽提与纯化。

（2）引物的选择：首先要知道待扩增基因片段两侧DNA的序列，然后用化学合成法合成一对与两侧DNA序列互补的寡聚核苷酸为引物，长度一般为20～30核苷酸。引物的选择应注意下列几点：①其序列是所要扩增基因特异的；②堿基随机分布，避免成堆的嘌呤或嘧啶；③不会自体形成二级结构；④一对引物不应自身互补。

（3）DNA聚合酶：选用TaqDNA聚合酶，它能耐高温，产量高，扩增长度可达10kb以上，加一次酶可进行不断循环。

基因组DNA为0.1μg；缓冲液含50mmol/L氯化钾，10mmol/L TrisHCl（pH8.4），1.5mmol/L氯化镁，100μg明胶；每一引物为0.25μmol/L；dATP，dCTP，dGTP，dTIP各为200μmol/L；DNA聚合酶为2.5U，终体积为100μl。加数滴液体石蜡防止蒸发。

反应周期：①变性：90℃ 30～60s；②引物和模板的退火温度：40～60℃ 30～60s；③延伸：72℃ 1～2min。经反复循环30～40次，最后1次72℃引物延伸7min后终止。除去液体石蜡后，产物可供分析。经琼脂糖凝胶电泳后，用溴乙锭染色，经紫外灯照射可见预料扩增长度的荧光条带。产物也可与放射标记或非放射标记的寡聚核苷酸探针行Southern印迹杂交或点渍印迹杂交。如用PCR自动仪则更为方便，将反应试剂、DNA模板及TaqDNA聚合酶加入试管后，放进已调好程序，即所需变性→退火→延伸各自的温度和时间及循环次数的自动仪中进行反应，即可获得满意的扩增产物。

阴性。

（1）肝癌患者有较高的端粒酶阳性率（85%），端粒酶活性阳性者AFP水平明显高于端粒酶活性阴性者。端粒酶活性与肿瘤大小、组织学分级及肿瘤转移无显著相关。端粒酶有可能成为诊断肝癌的肿瘤标志物。

（2）端粒酶在大多数恶性肿瘤组织有较高水平表达，如神经母细胞瘤（94%）、乳腺癌（93%）、大肠癌（93%）、胃癌（85%）、前列腺癌（84%）、肺癌（80%）等。端粒酶活性与肿瘤的临床分期及预后密切相关。因此，端粒酶是目前最特异和具有普遍性的肿瘤标记物。

（3）在少数良性病变（如肝炎、肝硬化、良性脑膜瘤等）组织中可有很弱的端粒酶活性。

近年来，“端粒、端粒酶假说”已被越来越多的研究所证实，以端粒酶活性水平为肿瘤诊断的生物标志和预后指标。

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