内切酶和外切酶的应用(外切酶和内切酶图解)

一、关于DNA外切酶具有核酸外切酶活性的相关概念

DNA聚合酶具有两种活性,一个是聚合酶活性,5’——3’,意思是说在合成的单链或者引物链的3’加上与模板链互补的脱氧核苷酸

此外,DNA聚合酶还有一个外切酶活性位点,用来校正剪切掉错误的脱氧核苷酸.这个活性是3’——5’方向,所以可以将新链3’端的错误配对脱氧核苷酸去掉.

两个位点对于DNA的结合能力是不同的,正常情况（即配对正确）下,聚合酶位点的结合能力强,而外切酶位点结合能力弱,因此DNA聚合酶从5’向3’合成双链DNA；当合成时出现错配的情况,聚合酶位点与错配链的结合能力下降约100倍,而外切酶的结合能力不变,强于此时的聚合酶位点,所以DNA3’端移向外切酶位点,并剪切掉错误的配对；当错误配对被切掉后,相当于重新回到了正确配对的情况,故而聚合酶位点结合能力再次强于外切酶位点,DNA回到聚合酶位点,继续合成新链.

这是由我们分子生物学的课程中学来的,我们使用的教材是《molecular biology of genes》,由发现DNA双螺旋的Waston主编

如果你还是不懂,可以将邮箱发给我,我可以将我们上课的课件发给你

二、限制性内切酶和核酸外切酶有何区别

两者同属核酸酶,只是切割核酸的方式不一样而已。

凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶，凡能从多核苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。

而能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为限制性核酸内切酶(限制酶）。

扩展资料：

内切酶主要分成三大类。

第一类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在识别点附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链,但是切割的核苷酸顺序没有专一性,是随机的。这类限制性内切酶在DNA重组技术或基因工程中没有多大用处,无法用于分析DNA结构或克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等。

第二类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的。所以总能得到同样核苷酸顺序的DNA片段,并能构建来自不同基因组的DNA片段,形成杂合DNA分子。因此,这种限制性内切酶是DNA重组技术中最常用的工具酶之一。

第三类内切酶的识别顺序是一个回文对称顺序,即有一个中心对称轴,从这个轴朝二个方向“读”都完全相同。这种酶的切割可以有两种方式。一是交错切割,结果形成两条单链末端,这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键,所以称为粘性末端。

参考资料：百度百科-核酸外切酶

三、限制性核酸内切酶与核酸外切酶的区别是什么

1、内切酶切的是指定的磷酸二酯键，目的是开链；外切酶切的是任意的磷酸二酯键，目的是水解DNA，获得单个的核苷酸。

2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。

3、它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。

扩展资料：

限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。

有的菌株含酶量极低，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius(HalⅢ酶）就是高产酶菌株。

据报道从10g的H. aegyptius的细胞中，能分离提纯出可消化l0gλ噬茵体DNA的酶量。到目前为止，细菌是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。

参考资料：百度百科-核酸内切酶

参考资料：百度百科-外切酶

四、什么是核酸酶,什么是核酸外切酶

它们都是核酸酶，但是它们切核酸的方式不同。具体不同的地方在于：

1、水解位置不同；

2、切点要求不同；

3、分类不同。

从多核苷酸链末端水解核酸的酶称为核酸外核酶，而从多核苷酸链中部水解核酸的酶称为核酸内核酶，两者都是核酸酶，但它们切割核酸的方式不同。

核酸内切酶:

核酸内切酶是在核酸水解酶中，水解DNA分子链内部磷酸二酯键生成寡/寡聚核苷酸的酶。从对底物的特异性来看，可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等仅分解DNA的酶。

脾脏RNase、RNaseT1等仅分解RNA的酶；还有就是如链孢霉（Neurospora）核酸酶这类既分解DNA又分解RNA的酶。

一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如HindⅢ、EcoRⅠ等具有限制性的，能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。

核酸外切酶:

核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNTP，RNA为NTP）。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。

单链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能够从5′-末端或3′-末端呈单链状态的DNA分子上降解DNA，产生出寡核苷酸短片段，而且是唯一不需要Mg2+离子的活性酶，是一种耐受性很强的核酸酶。

核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。它只切割末端有单链突出的DNA分子。

扩展资料：

核酸内切酶（endonuclease）在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶，与核酸外切酶相对应。

从对底物的特异性来看，可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶；RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。

参考资料：百度百科-外切酶

百度百科-核酸内切酶

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